De hábitos crepusculares, nocturnos y solitarios, recorre grandes extensiones en busca de su alimento, generalmente por los mismos senderos. Su dieta está constituida de pequeños animales, insectos, víboras, ranas, aves y roedores así como también frutos silvestres, agradándole especialmente una solanácea (Solanum grandiflorum), higos y caña de azúcar.

Pese al nombre de lobo que se le da, no es el aguara guasu un animal feroz, sino más bien tímido y no hace daño al ganado

Ni parece aficionado a saquear gallineros. Rehuye las concentraciones humanas, tiene miedo al fuego y pocas veces se enfrenta a perros.

No tiene más de dos hijos por parto y mientras son pequeños la madre los guarda en una especie de nido hecho en lo más profundo del pajonal o en algún monte impenetrable. Los cachorros nacen en invierno luego de dos meses de gestación y presentan una coloración negruzca. Viven de 12 a 15 años. Durante la época de reproducción una pareja necesita aproximadamente un territorio de 25 kilómetros cuadrados.

El aguará guasu tiene muchos problemas para su supervivencia; entre otros se puede citar la destrucción de su hábitat por el avance del hombre, es cazado indiscriminadamente al pensar que es dañino y es cotizado trofeo de caza. Por estos motivos se encuentra amenazado de extinción.